逆转录酶逆转录酶又称反转录酶,是一种rna介导的dna聚合酶,其反应过程中体现出三种功能为:以rna作为模板合成互补dna链 (complementary dna, cdna),形成rna:cdna杂交链;发挥rnase h活性,降解rna:dna杂交链中的rna模板;以cdna作为模板合成第二链dna,形成双链dna(如下图)。其中,rnaseh活性是逆转录酶的一个内在特性,可在合成过程中同时切割rna:cdna杂合链中的rna模板,该特性可能降低逆转录效率,因此在实际应用中,基础型wln8203kit试剂盒批发,常采用人工改造后的低或无rnase h活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有amv和m-mlv,amv分离自禽类成髓细胞瘤---(avian myeloblastosis virus, amv),m-mlv逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠---(moloney murine leukemia virus, mmlv),前者热稳定性优于后者,但amv逆转录酶的rnaseh活性也---,不利于长片段cdna合成。市面上多使用经基因工程改造过的m-mlv逆转录酶,其热稳定性改进,可在50℃左右工作,同时rnase h活性进一步减弱,提高了其逆转录效率。
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比pcr复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
lamp相关酶环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, lamp)所用酶主要为具有链置换功能的dna聚合酶,荧光型wln8203kit试剂盒,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为bst dna聚合酶,用于dna链合成,同时具有链置换功能;若检测模板为rna,则可加入逆转录酶配制成rt-lamp反应体系。
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