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    2022-6-14

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rpa技术的基本原理

rpa技术主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°c左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,防止进一步替换。在这个体系中,进口milenia hybridetect价格,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。rpa扩增的基础体系(twistamp? basic)含有dna扩增所需的所有试剂,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,进口milenia hybridetect价格,产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的rpa应用。举例来说,twistamp? exo结合了的exo探针技术和---外切酶iii,能实现数据的实时读取,就像荧光定量pcr一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、---外切酶iii和逆转录酶结合起来,可以一步实现rna模板的实时扩增。




恒温扩增技术

应用领域:广泛应用于---诊断,食品安全检测,动物---检测等领域

技术特点:快速,特异,无需专门设备

类型:取代pcr的恒温---扩增技术,目前有应用前景的就是rpa技术,milenia hybridetect价格,此外也有一些其他恒温扩增技术,主要包括:

1. 滚环---扩增( rolling circle amolification,rca )

2.环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification,lamp)

3.链替代扩增

4.依赖---序列扩增( nucleicacid sequence based amplification ,nasba)

5.解链酶扩增( helix dependent amplification, had)





rpa与lamp对比

lamp:环介导等温扩增法的特征是针对目标dna链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型dna合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。

rpa:主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。

重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。




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