rpa 作为颠覆 pcr 的---性方法的------源于其特定的反应成分(表 1)和机制。 对于成功的 rpa 分析,细微差别取决于内在因素、引物、探针和---模板的设计; 并且与外在因素有关,如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板dna。 此外,rpa 过程中的---标记、rpa 扩增子纯化和扩增后处理也是 rpa 检测成功的重要细节。 本节提供从 rpa 文献中总结的这些实用信息,作为 rpa 检测设计的指南。
1. rpa能实现多重化吗?
可以。rpa技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过,多重化
2.能否对模板进行定量?
可以。扩增子达到可检出水平的时间,依赖于反应起始时的模板量。初始
3能否进行荧光终点分析?
可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光,进口u-star------侧流检测试剂盒价格,荧光增强意
4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?
支持。在rpa反应中,连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差
5跑胶前需要回收rpa产物吗?
需要。rpa反应中的物质会干扰琼脂糖电泳,如果不进行产物回收,跑出
raa技术 是重组酶介导等温---扩增技术(recombinase aided amplification)的简称,是一种利用重组酶、单链结合蛋白、dna聚合酶在等温条件下(佳温度37℃)进行---扩增的技术。具体原理为:重组酶、单链结合蛋白、引物形成复合体扫描双链dna,在与引物同源的序列处使双链dna解旋,单链结合蛋白(ssb)防止单链dna复性,在能量和dntp存在的情况下,由dna聚合酶完成链的延伸,5-20分钟就可实现仪器扩增。
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