等温---扩增的新进展为人工---提供了简化的孵育条件,只需要恒温而不是热循环。单一温度培养降低了设备要求,开辟了突破实验室界限并在资源匮乏环境中进行扩增的新途径。通过减少扩增时间,进口twistamp liquid basic,消除重复的加热和冷却步骤还为低资源实施提供了第二个优势。更快的反应发生不仅因为加热和冷却时间的减少,而且因为多个分子反应可以异步进行,而不是在人工加热和冷却循环中顺序操作。自 1990 年代初以来,大量的等温---扩增方法采用了各种反应机制。
lamp:环介导等温扩增法的特征是针对目标dna链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型dna合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
rpa:主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,进口twistamp liquid basic,防止进一步替换。在这个体系中,进口twistamp liquid basic,由两个相对的引物起始一个合成事件。
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