rpa技术主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°c左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,进口pcrd3kit---试纸条价格,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。rpa扩增的基础体系(twistamp? basic)含有dna扩增所需的所有试剂,进口pcrd3kit---试纸条价格,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,pcrd3kit---试纸条价格,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的rpa应用。举例来说,twistamp? exo结合了的exo探针技术和---外切酶iii,能实现数据的实时读取,就像荧光定量pcr一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、---外切酶iii和逆转录酶结合起来,可以一步实现rna模板的实时扩增。
2018年,twistdx推出了一系列全新的液态重组酶聚合酶扩增 (rpa)试剂盒,这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 dna/rna 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
twistamp??liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态rpa试剂,该形态对于在实验室执行 pcr 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中,用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的rpa反应体积,配制用于多次反应的预混液,或者以各种 rpa 组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态twistamp? rpa试剂盒这一---产品,本次新推出的?twistamp? liquid试剂盒是现场试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的rpa法(该方法有时甚至采用与pcr相同的引物)取代 pcr法,以及更容易地开发出定制的试验。
lamp:环介导等温扩增法的特征是针对目标dna链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把基因模板、引物、链置换型dna合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
rpa:主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。
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