尿dna糖基化酶尿dna糖基化酶(udg酶)又称尿-n-糖基化酶(ung酶),可水解含尿的单链和双链dna释放出游离尿,而对rna无活性,与dutp搭配使用,可建立成pcr防污染体系。其原理如下:在pcr体系---dttp部分或全部替换为dutp后,raawle8202kit试剂盒,使得反应生成含有du碱基的扩增产物,这些扩增产物不同于天然模板,在进入含有udg酶的反应体系时,可被udg酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的n-糖基键,而经切割后的dna链在碱性或高温条件下易于断裂降解,从而失去被当作模板再扩增的能力,因此可防止扩增子污染(如下图)。市面上的udg酶主要有普通型和热敏型,荧光型wle8202kit试剂盒,其中热敏型udg酶在室温条件下即可催化反应,50℃以上加热可使其灭活,防止其降解后续pcr形成的含du扩增产物。虽然udg/dutp体系具有防污染功能,但在实际测试中还得---pcr的效率和灵敏度。一方面需---pcr扩增产物掺入足够量的尿碱基,从而可被udg有效切割;另一方面也需要---反应体系添加的dutp不会明显影响pcr效率,因此dttp和dutp的佳比例需通过优化确定。
tma相关酶
依赖转录介导扩增(transc ription mediated amplification, tma)的扩增模板为rna或单链dna,检测的扩增产物为rna,详细原理可参考转录介导的---扩增技术小结。该体系所用酶有两种:m-mlv逆转录酶:用于模板rna逆转录成dna,并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列,用于后续转录过程;t7 rna聚合酶:以逆转录形成的dna为模板,wle8202kit试剂盒,转录合成检测产物rna。
荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计- -段长度为46-52nt与目的片段互补的序列作为荧光探针;
探针序列不与特---引物识别位点重叠,长度为46-52 nt ,rpawle8202kit试剂盒,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。
试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度≤-20°c ,避光保存,避免重压、反复冻融:
产品有效期: 12个月。
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