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恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些？

逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种rna介导的dna聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以rna作为模板合成互补dna链 (complementary dna， cdna)，形成rna:cdna杂交链；发挥rnase h活性，降解rna:dna杂交链中的rna模板；以cdna作为模板合成第二链dna，形成双链dna（如下图）。其中，rnaseh活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割rna:cdna杂合链中的rna模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无rnase h活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有amv和m-mlv，mira恒温扩增试剂盒，amv分离自禽类成髓细胞瘤---(avian myeloblastosis virus， amv)，mira恒温扩增试剂盒公司，m-mlv逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠---(moloney murine leukemia virus， mmlv)，前者热稳定性优于后者，但amv逆转录酶的rnaseh活性也---，不利于长片段cdna合成。市面上多使用经基因工程改造过的m-mlv逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时rnase h活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。

恒温快速扩增试剂盒应在怎样的温度下使用？

标准的era扩增试剂盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响，因为酶会逐渐地失去全部活性。对于rt试剂盒，我们建议客户在40℃下运行反应，因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。

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