rpa技术主要依赖于三种酶:能结合单链---(寡核苷酸引物)的重组酶、单链dna结合蛋白(ssb)和链置换dna聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°c左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-dna复合物,能在双链dna中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,进口横向流动试纸条,就会发生链交换反应形成并启动dna合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的dna链与ssb结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,进口横向流动试纸条,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。rpa扩增的基础体系(twistamp? basic)含有dna扩增所需的所有试剂,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,进口横向流动试纸条,就可以实现多样化的rpa应用。举例来说,twistamp? exo结合了的exo探针技术和---外切酶iii,能实现数据的实时读取,横向流动试纸条,就像荧光定量pcr一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、---外切酶iii和逆转录酶结合起来,可以一步实现rna模板的实时扩增。
---的原理是聚合酶链式反应(pcr)。如果你了---,那么应该能检测到---的---,我们可以利用体外dna扩增的方式扩增这些---并检测。pcr就是一种体外dna扩增的技术,简单来说就是可以让特定的dna分子一条链变两条链,两条变四条,四条变八条,每个循环---。然后通过看经过多少个循环这个dna分子的数量超过阈值,就可以计算原本样品中dna的量(也就是说每少一个循环超过阈值说明------的量多一倍)。一个30循环的pcr反应大概需要两小时。算上样品处理等时间应该会在四到五个小时左右,如果要等其他人一起做则更久。
rpa 便携、等温,可替代 pcr ,非常适合用于分子检测试剂、动物、食品安全、生物防御和农业中。
速度—— 检测时间 15 分钟以内;
敏感度—— 单分子检测,不需要 thermocyler ;
简单—— 稳定的冻干试剂,几乎没有硬件要求的---等温技术。
1.twistamp basic 试剂盒( 96 次)
2.twistamp exo 试剂盒( 96 次)
3.twistamp nfo 试剂盒( 96 次)
5.milenia hybridtech 2 侧向流试剂条
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