恒温扩增试剂盒

原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温---快速扩增技术：在恒温条件下（42 °c），特殊修饰的反转录酶利用特---引物dna和模板rna合成cdna链，反应体系中的重组酶、单链dna结合蛋白和dna聚合酶以新合成的cdna链为模板进行快速---扩增反应。适用于实验室级别的rna扩增以及其他检测用途的rna扩增使用。

产品特点：

本试剂盒具有灵敏度高、特---强、反应时间短（仅需30 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。

本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买pcr扩增仪等价格高昂的专属设备。

恒温扩增试剂盒常用酶简介

rpa相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, rpa)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满---力的恒温扩增技术:rpa、rca、sda、hda。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，定位至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助dna解链，以便启动扩增；单链dna结合蛋白：可与被置换出的dna单链结合，稳定单链结构；dna聚合酶：如bsu dna聚合酶，用于dna链合成，同时具有链置换功能。对于rna模板，需在反应中加入逆转录酶形成rt-rpa体系；若利用标记探针进行检测，还需加入---酶对探针序列进行切割，常用---酶有---内切酶 iv(endonuclease iv, nfo)和---外切酶 iii(exonuclease iii, exo)，或者可与crisps/cas系统搭配使用。

恒温扩增试剂盒操作步骤

提前30分钟将试剂盒所需组分取出,室温融化。鹿荡混匀。

1).每个干粉反应管加入29.4 ul abuffer (注意: abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 ulabuffer (注意: abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响) ;

2.每个反应管分别加入2 ul上游引物、2 ul下游引物和0.6 μ探针(引物和探针浓度为10 μm ,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)