恒温扩增试剂盒

本试剂盒可以用于rt-lamp等温扩增,rt-lamp即逆转录和loop-mediated isothermal amplification(环介导等温扩增)的结合,专门用于快速扩增rna。lamp是2000年才出现的一种新颖的等温---扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的dna聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特---和检测范围等指标上能---甚至优于rt-pcr技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、---、---等病原体的快速检测。

原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温---快速扩增技术：在恒温条件下（42 °c），特殊修饰的反转录酶利用特---引物dna和模板rna合成cdna链，反应体系中的重组酶、单链dna结合蛋白和dna聚合酶以新合成的cdna链为模板进行快速---扩增反应。适用于实验室级别的rna扩增以及其他检测用途的rna扩增使用。

产品特点：

本试剂盒具有灵敏度高、特---强、反应时间短（仅需30 mins）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。

本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买pcr扩增仪等价格高昂的专属设备。

恒温快速扩增试剂盒常用酶原料有哪些？

逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种rna介导的dna聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以rna作为模板合成互补dna链 (complementary dna, cdna)，形成rna:cdna杂交链；发挥rnase h活性，降解rna:dna杂交链中的rna模板；以cdna作为模板合成第二链dna，形成双链dna（如下图）。其中，rnaseh活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割rna:cdna杂合链中的rna模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无rnase h活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有amv和m-mlv，amv分离自禽类成髓细胞瘤---(avian myeloblastosis virus, amv)，m-mlv逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠---(moloney murine leukemia virus, mmlv)，前者热稳定性优于后者，但amv逆转录酶的rnaseh活性也---，不利于长片段cdna合成。市面上多使用经基因工程改造过的m-mlv逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时rnase h活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。

恒温扩增常用酶

恒温扩增的方法多种多样，其对应的酶体系也各有差别，且一般为多酶体系，在酶原料选择上相比pcr复杂，下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。

lamp相关酶环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, lamp)所用酶主要为具有链置换功能的dna聚合酶，详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为bst dna聚合酶，用于dna链合成，同时具有链置换功能；若检测模板为rna，则可加入逆转录酶配制成rt-lamp反应体系。